微生物培養(yǎng)基的配制?1、購買瓊脂條或瓊脂粉,瓊脂粉價格比較昂貴;2、配置肉湯培養(yǎng)基 3、加入瓊脂,加入的量為2%,為了省錢,可以加1.5%,就是每100毫升培養(yǎng)基中加入1.5克的瓊脂粉或瓊脂條 4、放入滅菌鍋中進行滅菌。如果不滅菌,需要放在電爐上進行加熱,如果配制用的是玻璃容器則加熱時需要墊石棉網(wǎng),那么,微生物培養(yǎng)基的配制?一起來了解一下吧。
1、常用玻璃儀器的準備
制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用.
(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用.
(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用.
(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用.其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用.
2、培養(yǎng)基的制備及儲存
(1)溶化:一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi).加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經(jīng)常攪拌,防止焦結(jié),待其溶解后補足水分.
在使用干燥培養(yǎng)基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振蕩,或延長時間以促進溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養(yǎng)成分被破壞.
(2)校正酸堿度(調(diào)節(jié)pH):培養(yǎng)基必須有適當?shù)膒H.因此測定pH是培養(yǎng)基配制過程中的重要步驟之一,測定pH的標準溫度為25士2℃.調(diào)節(jié)pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當調(diào)節(jié)緩沖液的pH時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌后的pH會比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會比最終pH調(diào)高0.2左右,滅菌后基本合適.因此對培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進行測定,并記下每次pH的測定結(jié)果,有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性,從而指導滅菌前pH的調(diào)節(jié).干燥培養(yǎng)基一般已校正過pH,用時也必須再驗證.測定時,一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化,或用pH計校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或堿液加以校正.調(diào)整pH后要加熱過濾,使培養(yǎng)基澄清.
(3)培養(yǎng)基的分裝:大批量配制時使用的自動分配器須經(jīng)校準和確認.每次使用前后,均要對分配器的管道系統(tǒng)進行沖洗,在分裝無菌培養(yǎng)基前,則要采用無菌硅膠管.
固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管.
平皿:傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱 中倒置30—60min.讓水蒸汽自然蒸發(fā).
斜面:制備低層斜面分裝于試管,約占容積1/5,滅菌后趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基,如沾有培養(yǎng)基應用布抹去,以避免污染.
高層斜面:制備高層斜面分裝于試管,約占試管容積的1/3,滅菌后趁熱放置成高層短斜面,待其凝固后應用.
分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時密封后必須在配制當天(2h內(nèi)最佳)進行滅菌處理.液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基,滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中.
培養(yǎng)基的滅菌:培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定.普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應延長至20min.含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌.血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細菌過濾器,過濾除菌.高壓滅菌應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物.以上的滅菌時間和溫度要經(jīng)過驗證確認,如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好.
1、購買瓊脂條或瓊脂粉,瓊脂粉價格比較昂貴;
2、配置肉湯培養(yǎng)基
3、加入瓊脂,加入的量為2%,為了省錢,可以加1.5%,就是每100毫升培養(yǎng)基中加入1.5克的瓊脂粉或瓊脂條
4、放入滅菌鍋中進行滅菌。如果不滅菌,需要放在電爐上進行加熱,如果配制用的是玻璃容器則加熱時需要墊石棉網(wǎng),以防止加熱過程中破裂
5、滅菌完成后,冷卻就成固體了。
原理:1.單個微生物過小,一般采取菌落培養(yǎng)法進行培養(yǎng)觀察.
2.由于不同的微生物生長環(huán)境不同,種群間有明顯界限.一個菌落可認為是同一菌種的集合.
儀器:接種鏟和接種針(用于陸生菌種) 接種環(huán)(用于水生菌種) 酒精燈 培養(yǎng)皿
步驟:1.配置不同濃度的營養(yǎng)液稀釋液:取營養(yǎng)液1ml溶于9ml無菌水中,振蕩 5min配成10%的溶液.
2.將容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無菌水的試管中.以此類推制成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.
3.將試管口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養(yǎng)皿中,在各培養(yǎng)皿上標上濃度.
4.將有細菌生長的樣品容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,用接種環(huán)挑取菌落上的少量菌體加入10%的營養(yǎng)液中.把接種環(huán)放在酒精燈上灼燒滅菌,再次取樣加入盛1%的營養(yǎng)液的培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰)中.重復這個操作,將各濃度的營養(yǎng)液接上種.
5.輕輕搖勻接上種的培養(yǎng)皿,置于恒溫箱內(nèi)37攝氏度保存,2~3天后就有菌落出現(xiàn).
配制培養(yǎng)基的七個過程如下:
1.選擇培養(yǎng)基。根據(jù)所需培養(yǎng)的微生物種類、生長條件等特性,選擇適合的培養(yǎng)基。
2.準備試劑和儀器。制備培養(yǎng)基需要一些試劑和儀器,如稱量器、攪拌器、pH計等。
3.稱量干粉培養(yǎng)基。稱量干粉培養(yǎng)基時為避免污染,可用專用角匙。
4.配制培養(yǎng)基。自行配制的培養(yǎng)基,各營養(yǎng)成分應按要求順序加入,避免產(chǎn)生沉淀。
5.溶解干粉培養(yǎng)基。稱量好的干粉培養(yǎng)基應先溶解再高壓滅菌。
6.加棉塞。需要加棉塞的培養(yǎng)基應松緊適當。
7.高壓蒸汽滅菌。配制好的培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌。
擴展知識:
培養(yǎng)基是一種人工模擬自然環(huán)境,以支持微生物生長、繁殖和分泌所需營養(yǎng)物質(zhì)的過程。它是生物學和農(nóng)業(yè)領域中研究和應用的重要工具。培養(yǎng)基通常由水、碳源、氮源、生長因子、礦物質(zhì)、pH調(diào)節(jié)劑等組成。水是培養(yǎng)基中最重要的成分。
因為它提供了微生物生長所需要的大部分介質(zhì)。碳源是微生物生長所需要的主要能源來源,它可以是糖、有機酸或其他有機化合物。氮源是微生物生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì)之一,它可以是氨基酸、尿素或其他含氮化合物。生長因子是微生物生長所必需的微量營養(yǎng)物質(zhì)。
如維生素、輔酶等。
是按照微生物生長的營養(yǎng)需求及其相互比例配制的。牛肉膏和蛋白胨提供微生物生長所需的蛋白質(zhì)、核酸和維生素、無機鹽(微量元素),瓊脂只為培養(yǎng)基提供半固體的支撐結(jié)構(gòu),不提供微生物生長的營養(yǎng)。
有時,也根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的特殊需要配制培養(yǎng)基,如特別提供某種營養(yǎng)素,或?qū)iT缺乏某種營養(yǎng)素,使微生物得以鑒別、分離。
以上就是微生物培養(yǎng)基的配制的全部內(nèi)容,配制基礎培養(yǎng)基:稱取上述試劑,加入蒸餾水中,加熱溶解并攪拌至均勻。調(diào)節(jié)pH值:使用稀鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至7.4左右。高壓蒸汽滅菌:將配制好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌處理,以殺滅其中的微生物。冷卻與保存:滅菌后,待培養(yǎng)基冷卻至適宜溫度,可加入瓊脂并均勻攪拌。