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儀器設(shè)備：電子天平（AUY120型，日本島津）1臺(tái)，pH酸堿度計(jì)（雷磁pHSJ—3F型，上海精密科學(xué)儀器有限公司）1臺(tái)；250ml容量瓶3個(gè)；50ml燒杯3個(gè)
試劑：pH=4.00、6.86、9.18的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：將 pH 分別為 4.00、6.86、9.18 的緩沖劑（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）各自倒入 250ml 容量瓶中，以少量去離子水沖洗藥劑塑料袋內(nèi)壁，定容到刻度，搖勻備用；
1mol/L氯化鉀溶液：將 74.6g 氯化鉀（舉巧分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）用去離子水溶于容量瓶中，定容至1000mL即成；
0.01mol/L氯化鈣溶液：將 147.02g 氯化鈣（CaCl2.2H2O，分析純）溶于燒杯中，轉(zhuǎn)移至 1000mL容量瓶，定容。然后量取10mL溶液，稍加稀釋后調(diào)節(jié) pH （如何調(diào)節(jié)pH）為 6，用去離子水定容到1000mL。
步驟：
1) 稱取3份 10.0g 過(guò)搏伍 2mm 篩的樣品于 50ml 燒杯中，加入 25mL 無(wú)二氧化碳的蒸餾水或 1mol/L 氯化鉀溶液(酸性土壤)，或 0.01mol/L 氯化鈣溶液(中性和堿性土壤) ；（怎樣判定底泥樣品的酸堿性）
2)用玻璃棒劇烈攪拌 1-2min，使基答或底泥樣品充分分散，靜置 30min，備測(cè)；
3)按儀器說(shuō)明書(shū)開(kāi)啟 pH 計(jì)，預(yù)熱 20min 后，將 pH 計(jì)的復(fù)合電極和溫度傳感器放入標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，校準(zhǔn)所用儀器；
4)將用超純水清洗干凈的 pH 計(jì)的復(fù)合電極插入底泥浸提液中，讀出 pH 值。
天津市大茂化配物學(xué)試劑廠是1997-02-17在天津市東麗區(qū)注冊(cè)成立的非公司私營(yíng)企業(yè)，注冊(cè)地址位于天津市東麗區(qū)華明街北于堡村西。
天津市大茂化學(xué)試劑廠的統(tǒng)一社會(huì)信察首用代碼/注冊(cè)號(hào)是91120110600855299B，企業(yè)法人閆義水，目前企業(yè)處于開(kāi)業(yè)狀態(tài)。
天津市大茂化學(xué)試劑廠的經(jīng)營(yíng)范圍是：化學(xué)試劑制造、分裝；化工原料（以上涉及化學(xué)危險(xiǎn)物品憑許可證經(jīng)營(yíng)）、實(shí)驗(yàn)室儀器、設(shè)備、耗材、儀器儀表、玻璃儀器、塑料制品批發(fā)兼零售；普通貨運(yùn)。（涉及國(guó)家有專項(xiàng)專營(yíng)規(guī)定的，按規(guī)定執(zhí)行；涉及行業(yè)許可的，憑許可證或批準(zhǔn)文件經(jīng)營(yíng)）。在天津市，相近經(jīng)營(yíng)范圍的公司總注冊(cè)資本為423146萬(wàn)元，主要資本集中在 100-1000萬(wàn) 和 1000-5000萬(wàn)敗賣(mài)數(shù) 規(guī)模的企業(yè)中，共1185家。本省范圍內(nèi)，當(dāng)前企業(yè)的注冊(cè)資本屬于良好。
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紅霉素明膠微球制備工藝的研究
李 桃1，楊 帆2，佃少娜1，伍善廣2，陳 穎2，劉星辰2，傅英梅1
（1.廣東省人民醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2．廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣東 廣州 510006）
摘 要：目的 通過(guò)正交設(shè)計(jì)篩選出制備紅霉素明膠微球的最佳工藝。方法 用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化紅霉素明膠微球制備工藝，通過(guò)測(cè)定紅霉素明膠微球的平均粒徑、載藥量、包封率，工藝重現(xiàn)性進(jìn)行研究。結(jié)果 紅霉素明膠微球的形態(tài)圓整，且藥物確已包裹在微球中，微球的平均粒徑為平均粒徑為（14.15±0.20）μm，載藥量(5.83±0.38)％，包封巖陵數(shù)率為(65.70±0.56)％，7～28 μm占總數(shù)的90.16%以上，最佳工藝條件重現(xiàn)性良好。結(jié)論 本研究獲得了制備紅霉素明膠微球較滿意的工藝。 關(guān)鍵詞：紅霉素；明膠；微球
紅霉素（Erythromycin）是臨床上治療支原體肺炎、軍團(tuán)菌肺炎的首選藥物，但在體內(nèi)分布廣泛有效治療濃度維持時(shí)間短，容易誘發(fā)耐藥性，且不良反應(yīng)多。本研究以明膠為載體材料,通過(guò)控制微球粒徑使其靜脈注射后被肺毛細(xì)管床機(jī)械性截留、濃集于肺部, 又因明膠的不斷降解達(dá)到緩慢釋放藥物的作用，從而提高藥物的療效，減少毒副作用。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1.1 儀器與試藥
μV-7501紫外分光光度計(jì)(無(wú)錫科達(dá)儀器廠)，光學(xué)顯微鏡，800型離心機(jī)（江蘇省江蘇金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠），電熱恒溫水浴鍋（上杭儀器有限公司），CSB6L－180D超聲波清洗器（天津市考德斯科技有限公司）。
紅霉素原料(利君集團(tuán)鎮(zhèn)江制藥責(zé)任有限公司)，明膠（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心），液體石蠟（化學(xué)純，天津市大茂化學(xué)試劑廠），司盤(pán)－80（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司），25％戊二醛（分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠），其他試劑均為分析純。 1.2 紅霉素明膠微球的制備
根據(jù)乳化縮聚法原理，微球在制備過(guò)程中，首先藥物明膠溶液要與油相形成W/O型乳劑，再經(jīng)固化等處理方能成球。將適量紅霉素分散于明膠溶液中，并加熱至50℃左右，攪拌下滴加至50℃100ml含乳化劑司盤(pán)-80的液體石蠟溶液中，乳化10min形成W/O型乳劑后，立即轉(zhuǎn)移至5℃左右的
121
[1]
冰水浴中，待乳劑溫度降至10℃以下時(shí)，加入一定量的25％戊二醛交聯(lián)固化，再以異丙醇100ml脫水2h，抽濾，以異丙醇、石油醚洗滌3次，干燥，過(guò)篩后得黃色粉末狀明膠微球。
考慮到諸多因素對(duì)微球形成和質(zhì)量的影響，本文在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取影響微球性質(zhì)較顯著的4個(gè)因素作為考察對(duì)象，即明膠的濃度、乳化劑的用量、固化時(shí)間和攪拌速度，以平均粒徑、載藥量、包封率為考察指標(biāo)，根據(jù)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選出最佳處方工藝條件。 1.3 優(yōu)選粗首后制備工藝重現(xiàn)性的考察
按正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果得出的最優(yōu)處方工藝條件，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，通過(guò)對(duì)各指標(biāo)的測(cè)定，考察微球制備工藝的重現(xiàn)性。
1.4 微球載藥量及包封率的測(cè)定
本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版第二部，采用紫外分光光度法測(cè)定微球中紅霉素的含量。精密稱取紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至1 mg/ml，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描發(fā)現(xiàn)在209 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。而明膠不溶于乙醇，為了進(jìn)一步證實(shí)這一結(jié)論，將明膠用無(wú)水乙醇浸泡3 h，取上清液，在紫外檢測(cè)無(wú)吸收。因此，實(shí)驗(yàn)采用將明膠微球研磨至碎，用無(wú)水乙醇超聲溶解紅霉素，離心后取上清液于209 nm處測(cè)定樣品的紫外吸收光度，以測(cè)定微球中紅霉素的含量。
1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 配制紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品系列濃度，以無(wú)水乙醇為空白在209 nm波長(zhǎng)處測(cè)樣品的吸收度A，然后對(duì)C回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C=1.0107A－0.1192，相關(guān)系數(shù) r=0.9996。
1.4.2 微球中紅霉素含量的測(cè)定 精密稱取紅霉素明膠微球，微球研細(xì)，精密稱取粉末適量，置25 ml量瓶中,加入乙醇適量，超聲處理30min后，放冷加乙醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，在209nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度，并利用標(biāo)準(zhǔn)曲線求出微球中紅霉素含量。
微球載藥量＝（微球中紅霉素的含量/微球的總重量）×100％ 微球包封率= (微球中藥物總量/投藥量) ×100%1.5 微球形態(tài)粒徑大小
采用顯微計(jì)數(shù)法考察微球的粒徑，每次計(jì)數(shù)不少于500粒。 2 結(jié)果
2.1 紅霉素明膠微球制備工汪旦藝的優(yōu)選
根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果，選取影響微球性質(zhì)較顯著的4個(gè)因素作為考察對(duì)象，即明膠的濃度（A）、乳化劑的用量（B）、固化時(shí)間（C）、攪拌速度（D），以粒徑均勻度（S1）、包封率（S2）、載藥量（S3）為指標(biāo)，通過(guò)L9（3）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳工藝條件，試驗(yàn)結(jié)果如表1和表2所示。
122
4[5]
[4][3]
[2]
表1 正交試驗(yàn)的因素和水平表
A（％）
因素水平
明膠濃度
乳化劑用量
固化時(shí)間
攪拌速度
600 1000 1400
1 15 2.0 0.5 2 20 2.5 1.0 3 25 3.0 1.5
表2 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)與結(jié)果
平均粒徑
A B C D
/μm（S1）
包封率 （S2）/%
載藥量
綜合評(píng)分
B（ml）
C（h）
D（r/min）
試驗(yàn)號(hào)
（S3）/% （S1+S3+S4）
79.38 80.91 87.81 62.54 76.98 81.68 61.20 66.14 62.35
1 1 1 1 1 14.99 2 1 2 2 2 9.02 3 1 3 3 3 7.43 4 2 1 2 3 8.00 5 2 2 3 1 15.86 6 2 3 1 2 14.07 7 3 1 3 2 19.56 8 3 2 1 3 15.94 9 3 3 2 1 19.05 質(zhì) 量指 標(biāo)
K1 248.10 203.12 227.20K2 221.20 224.03 205.80K3 189.69 231.84 225.99
218.71223.79216.49
59.82 4.57 67.00 4.89 73.00 7.38 51.72 2.82 58.10 3.02 64.35 3.26 39.92 1.72 47.65 2.55 41.89 1.41
R 58.41 28.72 21.40 7.30
紅霉素明膠微球的質(zhì)量一般可通過(guò)微球的平均粒徑、包封率、載藥量等指標(biāo)的加權(quán)求和值來(lái)衡量，通常加權(quán)求和值（S=S1+S2+S3）越大，質(zhì)量越好[1] 。由表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表明，影響紅霉素明膠微球質(zhì)量的因素影響順序?yàn)锳> B > C >D，最佳實(shí)驗(yàn)方案為A1B3C1D2，即明膠濃度為15％，乳化劑用量為3.0 ml，固化0.5 h，攪拌速度1000 r/min。 2.2 優(yōu)選后的制備工藝及其重現(xiàn)性的考察
按照最優(yōu)工藝制備紅霉素明膠微球3批，測(cè)定其得到微球的平均粒徑分別為（14.15±0.20）μm，載藥量(5.83±0.38)％，包封率為(65.70±0.56)％，7～28 μm占總數(shù)的93. 6%以上,說(shuō)明微球制備
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工藝的重現(xiàn)性良好。
2.3 最佳工藝微球形態(tài)粒徑大小和分布
按最優(yōu)處方工藝制備的紅霉素明膠微球，肉眼觀察含藥微球?yàn)榈S色粉末，在光學(xué)顯微鏡下觀察，紅霉素明膠微球呈圓形，表面光滑，不粘連或極少粘連，流動(dòng)性很好，分布均勻，其粒徑及分布情況見(jiàn)表1。
圖1 紅霉素明膠微球粒徑分布圖
3 討論
根據(jù)乳化縮聚法原理制備紅霉素明膠微球，其中選擇合適的乳化劑、固化劑是很關(guān)鍵的。在制備紅霉素微球過(guò)程中，得到穩(wěn)定的W/O型乳劑很重要，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以HLB值在5左右時(shí)微球的外觀、載藥量和包封率均較好，故選用司盤(pán)80作為乳化劑。明膠微球常用的固化劑有甲醛與戊二醛，考慮到紅霉素的穩(wěn)定pH為6～8，在pH小于6或大于8時(shí)都會(huì)迅速降效，而使用甲醛固化，則需要在堿性條件下才能完成，戊二醛只需在中性條件下即可固化完全，故選用25％戊二醛為固化劑。
實(shí)驗(yàn)對(duì)固化與脫水的先后順序進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，固化脫水的順序?qū)ξ⑶虻耐庥^和載藥量有顯著的影響。先脫水后固化，微球所結(jié)合的水分可被脫水劑迅速帶走，所得微球的外觀不圓整，故選擇先固化后脫水。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，攪拌速度與微球的平均粒徑有明顯的相關(guān)性，攪拌速度快，平均粒徑??；攪拌速度慢，平均粒徑大。要控制微球粒徑在7-15 μm范圍,攪拌速度為1000 r/min較合適。
通過(guò)L9(3)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，紅霉素明膠微球的平均粒徑為（14.15±0.20）μm，載藥量為(5.83
124
4
±0.38)％，為包封率為(65.70±0.56)％, 7～28 μm占總數(shù)的93.6%以上，且重現(xiàn)性好。
紅霉素的口服吸收不規(guī)則、且有肝毒性大等不良反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)研制了肺靶向紅霉素微球，以提高藥物療效、減少毒副作用。作為肺靶向藥物關(guān)鍵是控制微球粒徑的大小，本實(shí)驗(yàn)制備的微球平均粒徑為（14.15±0.20）μm，滿足肺靶向微球粒徑5～25 μm的范圍，但動(dòng)物體內(nèi)的相應(yīng)特性尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。
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[6]
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