蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾？那么，蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾？一起來了解一下吧。
前體蛋白沒性要進(jìn)行系列翻譯加工才能具功能熟蛋白加工類型種般幾種：n-端fmet或met切除、二硫鍵形、化修飾剪切合蛋白質(zhì)二0種同氨基酸組合蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)翻譯蛋白質(zhì)其物化官能團（醋酸鹽、磷酸鹽、同脂類及碳水化合物）附蛋白質(zhì)改變蛋白質(zhì)化性質(zhì)或造結(jié)構(gòu)改變（建立雙硫鍵）擴闊蛋白質(zhì)功能 再者酶蛋白質(zhì)n末端移除氨基酸或間肽鏈剪舉例說胰島素肽激素建立雙硫鍵剪兩并鏈間移走肽前體形蛋白質(zhì)包含兩條雙硫鍵連接肽鏈 其修飾像磷酸化控制蛋白質(zhì)機制部份蛋白質(zhì)令酶性化或鈍
【經(jīng)PEG修飾后的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的優(yōu)點】PEG化學(xué)修飾是修飾納米載體最常用的方法。經(jīng)PEG修飾后的NLC親水性增強．可阻止RES對NLC的吞噬．從而延長NLC在體內(nèi)的循環(huán)時間，并對體內(nèi)非RES的特異組織產(chǎn)生靶向作用。
在過去幾十年里，難溶性或水不溶性藥用活性成分（APIs）制劑的發(fā)展一直是制藥技術(shù)領(lǐng)域所面臨最艱巨的挑戰(zhàn)之一。隨著對難溶性的研究的加深，新的藥物傳遞系統(tǒng)不斷出現(xiàn)。固體脂質(zhì)納米粒（Solid lipid nanoparticles，SLN）是上個世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種新型藥物納米載體，它是以天然或合成的室溫下固態(tài)脂質(zhì)為載體，這種脂質(zhì)生理相容性強、毒性低。固體脂質(zhì)納米粒能夠有效的減少敏感APIs的降解，提高其穩(wěn)定性。由于其平均粒徑小，固體脂質(zhì)納米粒還可以提高APIs到達(dá)作用部位的傳遞量。2000年以后在固體脂質(zhì)納米較基礎(chǔ)上出現(xiàn)了納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Nanostructured lipid carriers，NLC)，被稱為第二代脂質(zhì)納米粒子。NLC與SLN不同之處在于其內(nèi)部結(jié)構(gòu)，NLC是以一定比例的液態(tài)油或混合脂質(zhì)代替了固體脂質(zhì)納米粒中的固體脂質(zhì)而制備出的新型固體脂質(zhì)納米粒。納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體解決了固體脂質(zhì)納米粒的載藥量低、物理穩(wěn)定性差等缺點，不僅有較高的載藥盤和較好的物理穩(wěn)定性，而且具有與固體脂質(zhì)納米粒同樣的控制藥物釋放作用。
【PEG修飾】是指采用PEG修飾劑，又稱聚乙二醇修飾劑，修飾性PEG，PEG修飾劑等（是帶有官能團的聚乙二醇），對蛋白質(zhì)藥物進(jìn)行修飾，以增加體內(nèi)半衰期，降低免疫原性，同時還可以增加藥物的水溶性。
摘要 磷酸化修飾是一種重要的蛋白質(zhì)化學(xué)修飾, 對蛋白質(zhì)功能的完成或改變起到重要作用。該領(lǐng)域的研究存在很多技術(shù)難點, 對該領(lǐng)域研究形成了挑戰(zhàn)。近年來相關(guān)技術(shù)有了很多突破, 磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章將從磷酸化蛋白的檢出、磷酸化蛋白質(zhì)和肽段的富集、生物質(zhì)譜技術(shù)的改進(jìn)以及磷酸化蛋白和多肽的定量與比較幾個方面介紹該研究領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展。 關(guān)鍵詞 磷酸化蛋白 磷酸化肽 生物質(zhì)譜 定量分析 生命活動與蛋白質(zhì)的動態(tài)變化密切相關(guān), 很多情況下某些蛋白質(zhì)的絕對量并不會發(fā)生明顯變化, 而是通過各種翻譯后修飾來完成或改
摘要 磷酸化修飾是一種重要的蛋白質(zhì)化學(xué)修飾, 對蛋白質(zhì)功能的完成或改變起到重要作用。該領(lǐng)域的研究存在很多技術(shù)難點, 對該領(lǐng)域研究形成了挑戰(zhàn)。近年來相關(guān)技術(shù)有了很多突破, 磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章將從磷酸化蛋白的檢出、磷酸化蛋白質(zhì)和肽段的富集、生物質(zhì)譜技術(shù)的改進(jìn)以及磷酸化蛋白和多肽的定量與比較幾個方面介紹該研究領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展。 關(guān)鍵詞 磷酸化蛋白 磷酸化肽 生物質(zhì)譜 定量分析 生命活動與蛋白質(zhì)的動態(tài)變化密切相關(guān), 很多情況下某些蛋白質(zhì)的絕對量并不會發(fā)生明顯變化, 而是通過各種翻譯后修飾來完成或改變其功能。在數(shù)量眾多的蛋白質(zhì)翻譯后修飾中, 磷酸化修飾是非常重要的一種, 現(xiàn)今發(fā)現(xiàn)的所有蛋白質(zhì)中超過30%可被磷酸化修飾。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾與多種生物學(xué)過程密切相關(guān), 如DNA損傷修復(fù)[1]、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)[2]、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[3]、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)[4]等。磷酸化蛋白質(zhì)及多肽的研究可幫助我們闡明上述過程的機理, 進(jìn)一步認(rèn)識生命活動的本質(zhì)。近年來不斷出現(xiàn)的許多相關(guān)的新技術(shù)、新方法推動了該領(lǐng)域研究的進(jìn)展。 1 磷酸化蛋白的檢出 當(dāng)前針對蛋白的研究絕大多數(shù)是基于電泳的, 膠上磷酸化蛋白點的檢出是一個重要環(huán)節(jié)。較早期的研究中最常用的方法是用32P標(biāo)記的磷酸根通過代謝進(jìn)入細(xì)胞中并被利用, 使得細(xì)胞內(nèi)的磷酸化蛋白帶有放射性的32P, 從而可在電泳后被檢出[5]。該方法需要接觸大量的放射性物質(zhì), 并且只能應(yīng)用于培養(yǎng)的細(xì)胞, 所以已經(jīng)逐漸被淘汰。利用抗磷酸化蛋白的抗體進(jìn)行Western blot檢測, 具有特異性好、分辨率高的優(yōu)點, 至今還是常用的手段[6], 但由于分析和制備不能用同一塊膠, 有時檢出的蛋白點與膠上的蛋白點很難對應(yīng), 使分析變得困難。Schulenberg 等[7]在2003年報道了一種小分子的熒光染料Pro-Q Diamond dye, 可對磷酸化蛋白質(zhì)特異性染色, 該方法方便、快捷且具有較高的靈敏性, 兼容質(zhì)譜鑒定, 隨后還可再進(jìn)行其它方法的染色。Martin 等[8]將一些蛋白質(zhì)和肽段列陣在幾種商業(yè)化的襯底上, 然后利用Pro-Q Diamond dye檢驗芯片上的蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化水平, 靈敏度可達(dá)到312-625fg, 這種芯片與高靈敏度檢出方法的結(jié)合提供了一個強有力的研究信號通路及磷酸酶抑制物的平臺。熒光雙向差異凝膠電泳(Fluorescent two dimensional difference gel electrophoresis, 2D-DIGE)是近幾年出現(xiàn)的一種基于雙向電泳的熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)差異比較的技術(shù), 具有非常好的檢出靈敏度, 并且由于所要比較的目的蛋白始終在相同的條件進(jìn)行一向、二向電泳并展示在同一張膠上, 從而減少了實驗誤差引起的差異, 該技術(shù)已經(jīng)成為比較蛋白質(zhì)組研究的有力工具。磷酸化蛋白質(zhì)只是某個蛋白質(zhì)組中的一小部分, DIGE技術(shù)不能對其特異性標(biāo)記, 所以利用DIGE技術(shù)對磷酸化蛋白的比較分析是困難的。Seisuke 等[9]很好的解決了這一問題, 他們在實驗中利用磷酸化蛋白富集試劑盒富集磷酸化蛋白后, 利用DIGE技術(shù)進(jìn)行差異分析, 擴展了DIGE技術(shù)的應(yīng)用范圍。 2 磷酸化蛋白質(zhì)、肽段的富集 由于磷酸化肽段相對于非磷酸化肽段來說是非常少的, 在質(zhì)譜鑒定時易被其它肽段掩蓋, 所以常常需要對磷酸化蛋白質(zhì)或肽段富集后再進(jìn)行鑒定。用于富集磷酸化蛋白質(zhì)、肽段的經(jīng)典方法有金屬離子親和層析(IMAC)[10]、生物素―親和素富集[11]、免疫沉淀[12]和磷酸化抗體親和層析[13]等方法。上述方法大多是基于層析技術(shù), 而層析柱填料的性質(zhì)則是影響富集效果的關(guān)鍵因素。2004年, Pinkse等[14]利用TiO2填料自制層析柱, 將自磷酸化蛋白PKG酶切產(chǎn)物用此柱分離后進(jìn)行在線ESI-MS/MS分析, 鑒定出PKG至少有8個磷酸化位點, 并發(fā)現(xiàn)Ser-26 和 Ser-44兩個新的磷酸化位點。Pinkse等認(rèn)為TiO2填料可與磷酸化肽段高效、特異的結(jié)合, 從而有效富集磷酸化肽段, 應(yīng)用前景很好。利用反相柱脫鹽、濃縮肽段之后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定是比較常用的肽段鑒定方法, 但對于親水肽段, 比如磷酸化后變?yōu)橛H水的磷酸化肽段鑒定效果不好。Larsen等[15]比較反相樹脂與石墨填料柱對磷酸化肽段的分離效果, 認(rèn)為后者可有效的滯留磷酸化肽段, 更適合磷酸化肽段的富集、分離和鑒定。對于磷酸化肽段的富集, 一些學(xué)者并沒有將目光僅僅局限在親和填料的改進(jìn)上, Steven等[16]發(fā)現(xiàn)在pH2.7左右大部分胰蛋白酶酶切肽段帶有兩個正電荷, 而肽段上有一個磷酸化修飾時則帶有一個正電荷, 根據(jù)這一現(xiàn)象, 可利用強陽離子交換色譜將帶有一個正電荷的磷酸化肽段富集。Steven等利用這一方法在Hela細(xì)胞核中鑒定出967個蛋白中的2 002個磷酸化位點, 得到了現(xiàn)今為止最大的磷酸化蛋白譜。 3 利用生物質(zhì)譜確認(rèn)磷酸化位點 利用一級質(zhì)譜結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜可確定磷酸化位點。例如通過MALDI-TOF/TOF一級質(zhì)譜可發(fā)現(xiàn)與肽段分子量理論值相差80 Da (HPO3=80 Da) 的質(zhì)譜峰, 該峰的二級質(zhì)譜圖中如果母離子與旁邊的最高強度的質(zhì)譜峰相差98 Da (中性丟失H3PO4=98 Da), 則可確定該肽段為磷酸化肽段(圖1), 進(jìn)一步通過二級或多級質(zhì)譜的譜圖確認(rèn)具體的磷酸化位點。此外, 利用β－消除反應(yīng)使絲氨酸、蘇氨酸磷酸化殘基轉(zhuǎn)化為氨乙基丙氨酸, 后者為賴氨酸的同形物, 此位點可被胰蛋白酶和Lys-C 肽鏈內(nèi)切酶等酶特異性識別、酶切, 通過質(zhì)譜即可很容易地判斷磷酸化位點。所以磷酸化位點的確認(rèn)有賴于簡化的質(zhì)譜譜圖和串聯(lián)質(zhì)譜的應(yīng)用以及質(zhì)譜檢測靈敏度的提高。近年來生物質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為蛋白質(zhì)磷酸化位點的檢測提供了更多可選擇的儀器和方法。 3.1 傅立葉變換回旋共振質(zhì)譜(Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry, FT-ICR MS) T-ICR MS是目前為止準(zhǔn)確度最高的質(zhì)譜, 可 得到1~2 ppm或更好的分辨率, 這樣的高分辨率使其適合于磷酸化位點的分析。離子捕獲解離(electroncapture dissociation, ECD)是應(yīng)用于FT-ICR MS的一種技術(shù), 是傳統(tǒng)的串聯(lián)質(zhì)譜的補充。可以輕松打開二硫鍵, 而易斷的翻譯后修飾的共價鍵卻可以在ECD破碎肽鏈時保存下來, 使得這一方法適合用于翻譯后修飾的研究。 圖1 利用MALDI-TOF/TOF譜圖鑒定磷酸化肽段 a: 酶切產(chǎn)物的一級質(zhì)譜圖。磷酸化肽段的質(zhì)譜峰用星號標(biāo)出, 其相對未磷酸化肽段的理論分子量位移80 Da (HPO3 = 80 Da); b: a中標(biāo)記星號的質(zhì)譜峰的二級質(zhì)譜分析。在圖中可見比母離子小98 Da (H3PO4 = 98 Da)的中性缺失峰
具體http://www.intlpeptide.com/qwtz/show-133.html
特征 N-連接O-連接
合成部位 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)主要在高爾基體
合成方式來自同一個寡糖前體 一個個單糖加上去
與之結(jié)合的氨基酸殘基天冬酰氨絲氨酸、蘇氨酸、羥脯、羥賴
最終長度 至少5個糖殘基1-4個糖殘基
第一個糖殘基 N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰半乳糖胺
大概清楚了吧！ 蛋白質(zhì)糖基化是一種蛋白質(zhì)修飾，作用嘛。可能有兩點：1為蛋白質(zhì)打上標(biāo)志，便于轉(zhuǎn)移。2影響多肽的構(gòu)象，增強蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性（或者其他作用）。 一般是這樣的：N連接糖基化發(fā)生在糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中； O連接糖基化發(fā)生在高爾基體中。 當(dāng)然，細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的糖基化也有，如哺乳動物細(xì)胞中把N-乙酰葡糖胺分子加到蛋白質(zhì)絲氨酸殘基的羥基上。進(jìn)化上的意義：寡糖鏈具有一定的剛性，從而限制了其它大分子接近細(xì)胞表面的膜蛋白，這就可能使真核細(xì)胞的祖先具有一個保護(hù)性的外被（像一個軟甲）同時又不象 細(xì)胞壁 那樣限制細(xì)胞的形狀與運動。
1、α—氨基酸脫水縮合形成肽鏈
2、肽鏈沿一定方向盤繞和折疊
3、再借助各種次級鍵卷曲折疊成特定的球狀分子結(jié)構(gòu)
4、（視蛋白質(zhì)種類而定,不一定有這一步）多個具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈,以適當(dāng)?shù)姆绞骄酆?形成蛋白質(zhì).
以上就是蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾的全部內(nèi)容，助。
