目錄RNA為什么不能PCR 將目的基因導入原核細胞的方法 獲取目的基因的方法有哪三種 將目的基因導入微生物細胞中 氨基酸進出細胞有哪些方式
目的基因導入動物細胞的方法是顯微注射法。導入的介質可以是質粒,也可以是動物病毒侵染。
顯微注射法是利用管尖極細(0.1至0.5μm)的玻璃微量注哪如射如緩斗針,將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養的細胞中,然后藉由宿主基因組序列可能發生的重組、缺失、復渣磨制或易位等現象而使外源基因嵌入宿主的染色體內。
目的基因導入動物細胞的方法是顯微注射法。導入的介質可以是質粒知陸,也可以是動物病毒侵染。顯微注射法是利用管尖極細(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射針,將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養的細胞中,然后藉由宿主基因組序列可能發生的重組、缺失、復制或易位等現象而使外源基因嵌入宿主的染色體內。
擴展資料
顯微注射法轉基因的方式
直接把重組過的DNA注入受精卵的原核中,也就是將從胚胎提供者的輸卵管中取得的受精卵移到倒置顯襲枯微鏡上的微量注射臺上,然后利用固定吸量管固定住,之后注射針則依序穿過zonapellucida,ocytemembrane及malepronuleusmembrane后,將DNA注入,注入時拍猛洞可以見到原核膨大。
以小鼠受精卵雄原核的顯微注射為例,顯微注射所使用的受精卵固定吸管(holdingpipette)及注射針制備很困難,除影響操作時間外,也是影響轉基因效率及基因注入后之胚胎存活及轉基因成功與否極其重要的因子。
參考資料來源:-顯微注射法
檢測目的基因是否導入受體細胞的方法是:導入時用的運載體上如果有抗性基困嘩因(標記基因),就可以通過檢測抗性基因的表達來檢測,比如運載體pbr322
就帶有抗四環素基因和抗氨卞青霉素基因羨逗
要么汪派行就等目的基因在受體細胞中表達以后,然后根據特定的性狀來區分.
還有dna、mrna、蛋白質雜交法.
合成所最終需要的蛋白質,即最終所需要的產品.
可通過物汪轉染的方法將目的基因導入受體細胞;包括化學轉染罩猜仔法:1.deae-葡聚糖法,兆嫌2.磷酸鈣法,3.人工脂質體和物理方法:①顯微注射②電穿孔③基因槍等;此外還可通過輔助載體(如病毒)將目的基因導入到宿主細胞。
常用方法:基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌,枯草桿菌,土壤農桿菌,酵母菌和動植物細胞等。其中,對于細菌或植物細胞,常用質粒作為載體將目的基凳肆返因導入細胞內;動物細胞則用顯微注射的方法將目的基因導入動物受精卵的雄性原核中。
過程:用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞,主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目棗饑的基因導入受體細胞后,就可以隨著受體細胞的繁殖而復制,雹遲由于細菌的繁殖速度非常快,在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。