微生物菌種鑒定?【答案】:對于一株未知的細(xì)菌,首先要用經(jīng)典鑒定指標(biāo)進(jìn)行鑒定,包括形態(tài)、生理生化反應(yīng)、生態(tài)特性、生活史、血清學(xué)反應(yīng)以及對噬菌體的敏感性等。接著需要用現(xiàn)代的微生物學(xué)鑒定技術(shù)包括(G+C)mol%值法、核酸分子雜交法、那么,微生物菌種鑒定?一起來了解一下吧。
注射用水微生物超標(biāo)要做菌種鑒定
傳統(tǒng)方法細(xì)菌做革蘭氏染色 運動性試驗 各種代謝 然后查伯杰氏細(xì)菌手冊;用分子做的話提總DNA,pcr擴增16srDNA全長片段,上NCBI數(shù)據(jù)庫比對,選擇近緣序列構(gòu)建發(fā)育樹鑒定。
真菌的話主要根據(jù)形余鄭態(tài),特別是有性型生殖形態(tài)鑒定;分子的話一般擴增ITS區(qū)域,比對,建樹鑒定。
首先你要確定待鑒定的菌種一定是純種 。如果菌種不純,所觀察到的現(xiàn)象則是混合現(xiàn)象,這樣自然不會得到正確的結(jié)果。因此在鑒定之前,首先要將菌種純化。 純化方法,一般有2種:平板劃線單菌落分離法和單細(xì)胞分離法。前一種操作簡便,效果良好,適用范圍廣。
菌種鑒定的方法一般有常規(guī)鑒定和分子生物學(xué)方法:
(1)常規(guī)鑒定:菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色、菌毛染色、糖類分解實驗、吲哚實驗、淀粉水解實驗、V-P實驗、甲寬吵基紅實驗、檸檬酸鹽利用實驗、硝酸鹽還原實驗、接觸酶實驗等
(2)分子生物學(xué)方法:細(xì)菌16SrDNA菌種鑒定:提取DNA,特定引物PCR擴增,PCR產(chǎn)物純化測序,進(jìn)化樹豎巧頌分析;真菌18S rDNA/ITS菌種鑒定流程也是一樣的。
“+”代表陽性;“-”代表陰性。跟醫(yī)院里的診斷結(jié)果一個意思
"G+"代表革蘭氏陽簡仔燃性;"G-"代表革蘭氏陰性戚仔。
是兩組不同的概攔虛念,要區(qū)分概念。
實驗步驟:菌種鑒定工作是各類微生物學(xué)實驗室都經(jīng)常遇到的基礎(chǔ)性工作。不論鑒定對象屬哪一類,其工作步驟都離不開以下三步:①獲得該微生物的純種培養(yǎng)物;②測定一系例必要的鑒定指標(biāo);③查找權(quán)威性的鑒定手冊。一、經(jīng)典分類鑒定方法 群體:菌落形態(tài),在半固體或液體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)等
* 形態(tài)個體:細(xì)胞形態(tài),染色反應(yīng),各種特殊構(gòu)造等
*營養(yǎng)要求:能源,碳源,氮源,生長因子等
*生理、生化反應(yīng)酶;產(chǎn)酶種類和反應(yīng)物性等
* 代謝產(chǎn)物:種橡灶類,產(chǎn)量,顯色嘩如如反應(yīng)等
* 經(jīng)典指標(biāo) 生態(tài)特性:生長溫度,對氧的需要,宿主種類等
* 生活史特點
* 血清學(xué)反應(yīng)
* 噬菌體的敏感性
* 其它
經(jīng)典分類法
經(jīng)典分類法是一百多年來進(jìn)行微生物分類的傳統(tǒng)方法。其特點是人為地選擇幾種形態(tài)生理生化特征進(jìn)行分類,并在分類中將表型特征分為主、次。一般在科以上分類單位以形態(tài)特征、科以下分類單位以形態(tài)結(jié)合生理生化特征加以區(qū)分。 * A. 能在 60 o C 以上生長
* B. 細(xì)胞大,寬度 1.3~1.8mm ………………… 1. 熱微菌屬 ( Thermomicrobium )
* B. 細(xì)胞小,寬度 0.4~0.8mm
* C. 能以葡萄糖為碳源生長
* D. 能在 pH4.5 生長 …………………………… 2. 熱酸菌屬 ( Acidothermus )
* DD. 不能在 pH4.5 生長 …………………………………… 3. 棲熱菌屬 ( Thermus )
* CC. 不能以葡萄糖為唯一碳源 ……………… 4. 棲熱嗜油菌屬 ( 棲熱嗜獅菌屬 Thermoleophilum )
* AA. 不能在 60 o C 以上生長
二、現(xiàn)代分類鑒定方法
* 近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和各項新技術(shù)的廣泛應(yīng)用,促使微生物分類鑒定工作有了飛速發(fā)展。
首先如果你的菌株是自然界中分離得到,就只能鑒定到種,不能鑒定到株,因為多多少少和其他株系的細(xì)菌有區(qū)別,即便你做了一些特征的鑒定,發(fā)現(xiàn)和某一株細(xì)菌一模一樣,你也沒有理由說你的細(xì)菌就是那一株細(xì)菌,因為你不可能把所有的特征槐源都做完,株和株之間的關(guān)系就相當(dāng)于不同的人之間的關(guān)系,世界上不可能有完全相同的兩個人。除非你知道你的細(xì)菌本來就是某一株細(xì)菌擴增出來的(而且要保證沒有變異,否則就是一個新株),可是這樣就沒必要鑒定了搏明擾。
菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA,然后PCR擴增16srDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon對比即可。一般序列相似度在97%以上就可以認(rèn)為是同種細(xì)菌(當(dāng)然也有例外,DNA序列僅僅基旦是一個參考指標(biāo))。
【答案】:對于一株未知的細(xì)菌,首先要用經(jīng)典鑒定指標(biāo)進(jìn)行鑒定,包括形態(tài)、生理生化反應(yīng)、生態(tài)特性、生活史、血清學(xué)反應(yīng)以及對噬菌體的敏感性等。接著需要用現(xiàn)代的微生物學(xué)鑒定技術(shù)包括(G+C)mol%值法、核酸分子雜交法、16SrRNA寡核苷酸測序技術(shù)等手段對其進(jìn)行分基沒析,最終確定手物該細(xì)菌屬于畢鋒液哪個種。
以上就是微生物菌種鑒定的全部內(nèi)容,實驗步驟:菌種鑒定工作是各類微生物學(xué)實驗室都經(jīng)常遇到的基礎(chǔ)性工作。不論鑒定對象屬哪一類,其工作步驟都離不開以下三步:①獲得該微生物的純種培養(yǎng)物;②測定一系例必要的鑒定指標(biāo);③查找權(quán)威性的鑒定手冊。 一、。