目錄高考生物選修三高考題 生物選修一專題一高考題 生物選修3高考題 歷年高考生物選修三真題 高考生物選修一和選修三如何選擇
生物方面：選一主要是記憶的多些。但分不好得。選三只要理解內容，中碰得（供您參考啊。偶們學校統塵褲一選的三~）物理還是賣兄談學光學的好吧。 生物
專題一
1、果酒的制作原理 2、果醋的制作原理
3、說出果酒、果醋制作流程及注意事項（發酵瓶留1/3的原因、溫度控制） 4、果酒、果醋所需菌種（來源、代謝類型） 5、在果酒、果醋制作過程中如何防止發酵液被污染？ 6、如何檢測果汁發酵是否明茄有酒精的產生？
7、腐乳制作所需的微生物有哪些？主要是？來源于？其形態特征、代謝類型和繁殖方式分別是？
8、腐乳制作的原理是？制作流程是？發酵過程中產生的白毛是？吃腐乳的時候 “皮”是怎樣形成的呢？它對人體有害嗎？它的作用是什么？ 9、腐乳制作加鹽的作用是？有什么要求？ 10、腐乳制作中加香辛料的作用是什么？ 11、腐乳制作中加酒有什么要求？為什么？
12、泡菜制作的原理是？涉及到的微生物是？其代謝類型是？ 13、泡菜發酵過程中乳酸菌和雜菌的變化趨勢是？原因？
14、泡菜發酵過程中亞硝酸鹽的變化趨勢是？測定亞硝酸鹽含量激明察的原理及實驗步驟？ 專題二
1、培養基的主要成分是？分為幾種類型及劃分的依據是？
2、無菌技術的目的和關鍵是？消毒和滅菌的概念是？常用方法有哪些及實施對象是？ 3、制備培養基的步驟是？平板倒置的目的是？ 4、如何用平板劃線法純化大腸桿菌？
①其中為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？
②在作第二次以及槐伍其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 5、如何用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌？ 6、菌種保存的方法有？
7、如何對土壤中尿素分解菌進行分離？如何統計菌落數目？ 8、如何篩選和鑒別纖維素分解菌？ 專題三
1、細胞分化的概念是？
2、愈傷組織的特征是？什么叫脫分化和再分化？
3、植物組織培養的流程是？影響植物組織培養的因素有哪些？
4、植物組織培養最常用的植物激素是？原因是？使用順序及用量比值的結果是？ 5、菊花組織培養的實驗操作流程是？
6、什么叫外植體？對外植體消毒時的注意事項是？ 7、被子植物的花粉發育的過程是？
8、產生花粉植株的兩種途徑是？主要取決于什么？ 9、月季花培養的流程是？影響花培養的因素有哪些？ 10、確定花粉發育時期的方法是？染色方法有？ 11、菊花組織培養與月季花培養的異同是？ 專題六
1、植物芳香油的來源和提取方法是？
2、玫瑰精油的化學性質是？常用提取方法及流程是？影響玫瑰精油提取的因素有哪些？
3、橘皮精油的化學性質及主要成分是？提取方法及流程是？為什么不采用水蒸氣蒸餾法提取？
4、橘皮精油提取過程中石灰水浸泡的目的及時間是？兩次過濾的目的是什么？ 5、胡蘿卜素的化學性質是？分類及用途是？提取天然β胡蘿卜素的方法有？ 6、從植物中提取胡蘿卜素的方法、實驗流程及注意事項是？ 7、胡蘿卜素的提取中對萃取劑的選擇有什么要求？常用的是？ 8、影響胡蘿卜素提取的因素有哪些？
9、胡蘿卜素提取過程中水浴加熱、冷凝、過濾的目的是？
對于高科理科生而言，應該如何去備戰高考生物呢?高考生物考察的范圍是比較廣的，所以我們除了要復習必修課本的內容，選修一的知識點也要深入了解。下面是我為大家整理的高考生物必備的知識點，希望對大家有用!
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高考生物選修一知識
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高考生物知識重點
高考生物選修一知識
傳統發酵技術
1.果酒制作：
1)原理：酵母菌的無氧呼吸 反應式：C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。
2)菌種來源：附著在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培養的酵母菌。
3)條件：18-25℃，密封，每隔一段時間放氣(CO2)
4)檢測：在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應呈灰綠色。
2、果醋制作：
1)原理：醋酸菌的有氧呼吸。
O2，糖源充足時，將糖分解成醋酸
O2充足，缺少糖源時，將乙醇變為乙醛，再變為醋酸。
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O
2)條件：30-35℃，適時通入無菌空氣。
3、腐乳制作：
1)菌種：青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉(都是真菌)。
2)原理：毛霉產生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和aa ;脂肪酶將脂肪水解為甘油和脂肪酸。
3)條件：15-18℃，保持一定的濕度。
4)菌種來源：空氣中的毛霉孢子或優良毛霉菌種直接接種。
5)加鹽腌制時要逐層加鹽，隨層數加高而增加鹽量，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質。
4、泡菜制作：
1)原理：乳酸菌的無氧呼吸，反應式：C6H12O6 2C3H6O3+能量
2)制作過程：①將清水與鹽按質量比4：1配制成鹽水，將鹽水煮沸冷卻。煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了保證乳酸菌等微生物的生命活動不受影響。②將新鮮蔬菜放入鹽水中后，蓋好壇蓋。向壇蓋邊沿的水槽中注滿水，以保證乳酸菌發酵的無氧環境。
3)亞硝酸鹽含量的測定：
①方法：比色法;
②原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料。
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微生物的培養與應用
1、培養基的種類：按物理性質分為固體培養基和液體培養基，按化學成分分為合成培養基和天然培養基，按用途分為選擇培養基和鑒別培養基。
2、培養基的成分一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽P14
3、微裂跡生物在固體培養基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。
4、培養基還需滿足微生物對PH、特殊營養物質以及O2的要求。
5、獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。
6、常用滅菌方法有：灼燒滅菌，將接種如接種環、接種針滅菌;干熱滅菌：如玻璃器皿、金屬用具等需保持干燥的物品。高壓蒸汽滅菌：如培養基的滅菌。
7、用固體培養基對大腸桿菌純化培養，可分為兩步：制備培養基和純化大腸桿菌。
8、固體培養基的制備：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板
9、微生物常用的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。
10、平板劃線法是通過連續劃線，將菌種逐步稀釋分散到培養基表面，稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，分別涂布到培養基表面。當它們稀釋到一定程度后，微生物將分散成單個細胞，從而在培養基上形成單個菌落。
11、微生物的大源櫻計數方法：活菌計數法、顯微鏡直接計數法、濾膜法。
12、活菌計數法就是當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。統計的菌落數往往比活菌的實際數目低。因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的只是一個菌落。
13、顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法，但它包括了死亡的微生物。
14、設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響。提高實驗結果的可信度。①如何證明培養基是否受到污染：實驗組的培養基中接種要培養的微生物，對照組中滾叢的培養基接種等量的蒸餾水(設置空白對照)。②如何證明某選擇培養基是否有選擇功能：實驗組中的培養基用該選擇培養基，對照組中培養基用普通培養基(牛肉膏蛋白胨培養基)。如果普通培養基的菌落數明顯大于選擇培養基中的數目，則說明該選擇培養基有選擇功能。
15、如何分離分解尿素的細菌?培養基中以尿素為唯一氮源，加入酚紅指示劑，如果PH升高，指示劑變紅，可初步鑒定該菌能分解尿素。
16、如何分離分解纖維素的微生物?以纖維素為唯一碳源的培養基。
17、纖維素酶是一種復合酶，至少包括三組分：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。
18、篩選纖維素分解菌的方法：剛果紅染色法，其原理是剛果紅可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復合物無法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。(產生了透明圈，說明纖維素被分解了，說明有纖維素分解菌)
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高考生物知識重點
1、分離定律：在生物的體細胞中，控制同一性狀的遺傳因子成對存在，不相融合;在形成配子時，成對的遺傳因子發生分離，分離后的遺傳因子分別進入不同的配子中，隨配子遺傳給后代。
2、自由組合定律：控制不同性狀的遺傳因子的分離和組合是互不干擾的;在形成配子時，決定同一性狀的成對的遺傳因子彼此分離，決定不同性狀的遺傳因子自由組合。
3、兩條遺傳基本規律的精髓是：遺傳的不是性狀的本身，而是控制性狀的遺傳因子。
4、孟德爾成功的原因：正確的選用實驗材料;現研究一對相對性狀的遺傳，再研究兩對或多對性狀的遺傳;應用統計學方法對實驗結果進行分析;基于對大量數據的分析而提出假說，再設計新的實驗來驗證。
5、孟德爾對分離現象的原因提出如下假說：生物的性狀是由遺傳因子決定的;體細胞中遺傳因子是成對存在的;生物體再形成生殖細胞—配子時，成對的遺傳因子彼此分離，分別進入不同的配子中;受精時，雌雄配子的結合是隨機的。
6、薩頓的假說：基因和染色體行為存在明顯的平行關系。(通過類比推理提出)
基因在雜交過程中保持完整性和獨立性;在體細胞中基因成對存在，染色體也是成對的;體細胞中成對的基因一個來自父方，一個來自母方，同源染色體也是如此;非等位基因在形成配子時自由組合，非同源染色體在減數第一次分裂后期也是自由組合的。
薩頓由此推論：基因是由染色體攜帶著從秦代傳遞給下一代的。即基因就在染色體上。
7、減數分裂是進行有性生殖的生物，在產生成熟的生殖細胞時進行的染色體數目減半的細胞分裂。在減數分裂的過程中，染色體只復制一次，而細胞分裂兩次。減數分裂的結果是，成熟生殖細胞中的染色體數目比原始生殖細胞的減少一半。
8、配對的兩條染色體，形狀大小一般相同，一條來自父方，一條來自母方，叫做同源染色體。同源染色體兩兩配對的現象叫做聯會。聯會后的每對同源染色體含有四條染色單體，叫做四分體。
9、減數分裂過程中染色體數目減半發生在減數第一次分裂。
10、受精卵中的染色體數目又恢復到體細胞中的數目，其中有一半的染色體來自精子(父方)，另一半來自卵細胞(母方)。
11、基因分離的實質是：在雜合體的細胞中，位于一對同源染色體上的等位基因，具有一定的獨立性;在減數分裂形成配子的過程中，等位基因會隨著同源染色體的分開而分離，分別進入兩個配子中，獨立的隨著配子遺傳給后代。
12、基因的自由組合定律的實質是：位于非同源染色體上的非等位基因的分離和自由組合是互不干擾的;在減數分裂過程中，在同源染色體上的等位基因彼此分離的同時，非同源染色體上的非等位基因自由組合。
13、紅綠色盲、抗維生素D佝僂病等，它們的基因位于性染色體上，所以遺傳上總是和性別相關聯，這種現象叫做伴性遺傳。
14、因為絕大多數生物的遺傳物質是DNA，只有少數生物(如HIV病毒)的遺傳物質是RNA，所以說DNA是主要的遺傳物質。
15、DNA分子雙螺旋結構的主要特點：DNA分子是由兩條鏈組成的，這兩條鏈按反向平行方式盤旋成雙螺旋結構;DNA分子中的脫氧核苷酸和磷酸交替連接，排列在外側，構成基本骨架，堿基排列在內側;兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對，并且堿基配對有一定的規律。
16、堿基之間的這種一一對應的關系，叫做堿基互補配對原則。
17、DNA分子的復制是一個邊解旋邊復制的過程，復制需要模板、原料、能量和酶等基本條件。DNA分子獨特的雙螺旋結構，為復制提供了精確的模板，通過堿基互補配對，保證了復制能夠準確地進行。
18、遺傳信息蘊藏在4種堿基的排列順序之中，堿基排列順序的千變萬化，構成了DNA分子的多樣性，而堿基的特定的排列順序，又構成了每一個DNA分子的特異性。
19、基因是有遺傳效應的DNA分子片斷。
20、RNA是在細胞核中，以DNA的一條鏈為模板合成的，這一過程稱為轉錄。
21、游離在細胞質中的各種氨基酸，就以mRNA為模板合成具有一定氨基酸順序的蛋白質，這一過程叫做翻譯。
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一、酶在洗滌等方面的應用
1．加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉,目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶 、淀粉酶、纖維素酶 。其中應用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶 和堿性脂肪酶 。堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污跡從衣物上脫落。脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶也能分別將大分子的脂肪、淀粉、纖維素水解為小分子物質，使洗衣粉具有更強的去污能力。
酶制劑的特點：能夠耐酸、耐堿、忍受表面活性劑和較高的溫差舉槐度，并且通過特殊的化學物質將酶層層包裹，與洗衣粉其他成分隔離。
2、影響酶活性的因素有溫度 、酸堿度 和表面活性劑 。酶不能直接添加到洗衣粉中，因為洗衣粉中的表面活性物質會降低酶的答啟活性。將基因工程生產出的酶用特殊水溶性物質包裹起來，與洗衣粉的其它成分隔離開來。
3、加酶洗衣粉能減少對環境的污染，因為加酶洗衣粉可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷、無磷的方向發展。（普通洗衣粉的化學成分有：表面活性劑、水軟化劑、堿劑、漂白粉等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑、香精和色素，以及填充劑等。）
普通洗衣粉 加酶洗衣粉
相同點 表面活性劑可以產生泡沫，可以將油脂分子分散開，水軟化劑可以分散污垢
不同點 酶可以將大分子有機物分解為小分子有機物，小分子有機物易容于水，從而與纖維分開
4、可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如：已消失、顏色變淺、面積縮小等來判斷洗滌效果。
二、制備和應用固相酶
1、固定化酶是指在一定的空間范圍內起催化作用，并能反復和連續使用的酶。
原理：將酶固定在不溶于水的載體上，使酶既易催化反應，又易于回收，可以重復使用。
2、使用固定化酶技術，將這種酶固定在一種顆粒狀載體上，再將這些酶顆粒裝到一個反應柱內，柱子底端裝上分布著許多小孔的篩板。酶顆粒無法通過篩板的小孔，而反應溶液卻可以自由出入。生產過程中，將葡萄糖溶液從反應柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過反應柱，與固定化葡萄糖異構酶接觸，轉化成果糖，從反應柱的下端流出。反應柱能連續使用半年，大大降低了生產成本，提高了果糖的產量和質量。
3．固定化酶和固定化細胞是利用物理或化學的方法將酶或細胞固定在一定空間內的技術，包括包埋法、化學結合法和物理吸附法。一般來說，酶更適合采用化學結合和物理吸附法固定，而細胞多采用包埋法固定化。這是因為細胞個大，而酶分子很小；個大的難以被吸附或結合，而個小的酶容易從包埋材料中漏出。
4．包埋法法固定化細胞即將微生物細胞包埋在不溶于水的載體中。常用的載體材料有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。
固定化細胞是在固定化酶的基礎上發展起來的，它的優點如下：(1)省去了酶的分離手續.為多酶,無須輔因子再生；(2)細胞生長快,而且多,反應快；(3)可以連續發酵,節約了成本,而且在蒸餾和提取前不用分離去細胞,能一邊徘出發酵液,一邊進行培養,排除了產物抑制和消耗；(4)保持酶在細胞內的原始狀況,增加了酶的穩定,特別是對污染因子的抵抗力增加.
缺點：(1)必須保持菌體的完整,防止菌體自溶,否則,將影響產品純度；(2)必須防止細胞內蛋白酶對所需酶的分解,同時,需抑制胞內其他酶的活性止副產物的形成；(3)細胞膜,壁會阻礙底物滲透和擴散。
類型 優點 不足
直接使用酶 催化效率高，低耗能、低污染等。 對環境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產成本；反應后酶會混在產物中，可能影響產品質量。
固定化酶 既能與反應物接觸，又能與產物分離，固定在載體上的酶還可以被反復利用。 一種酶只能催化一種化學反應，而在生產實踐中，很多產物的形成都通過一系列的酶促反應才能得到的。
固定化細胞 成本低，操作更容易。 固定后的酶或細胞與反應物不容易接近，可能導致反應效虛友果下降等。
應用：1、某一實驗小組的同學，欲通過制備固定化酵母細胞進行葡萄糖溶液發酵實驗，實驗材料及用具齊全。（1）酵母細胞的固定采用的方法是包埋法。
（2）請完善該實驗小組的同學在制備固定化酵母細胞過程的步驟
①配制氯化鈣溶液時應用蒸餾水。 ②海藻酸鈉溶解應用小火間斷加熱，邊攪拌邊加熱。③海藻酸鈉溶液必須冷卻至室溫才能加入酵母細胞。④注射器中的海藻酸鈉和酵母細胞的混合物應滴入氯化鈣溶液中形成凝膠珠。
（3）該實驗小組用如圖所示的裝置來進行葡萄糖發酵
①為使該實驗中所用到的固定化酵母細胞可以反復運用，實驗過程中，一定要在無菌條件下進行。
②加入反應液后的操作是關閉活塞1和活塞2。
③裝置的長導管起到什么作用？釋放CO2，減小反應柱內壓力；防止空氣進入反應柱。
（4）實驗過程中，可能會觀察到的現象：有氣泡產生、有酒味散發
實驗過程中，裝置內可能會發生的反應式為：（有氧呼吸、無氧呼吸產生酒精和二氧化碳）
應用：2、麥芽汁可以滲入到由海藻酸鈉和啤酒酵母制成的凝膠珠中，啤酒酵母可以利用自身細胞內的一系列酶將可發酵性糖轉化成乙醇。下面是利用固定化酵母細胞發酵生產啤酒的實驗過程：
步驟1：酵母細胞的活化。稱取lg干酵母置于50mL燒杯中，加l0mL蒸餾水，攪拌，靜置1h。
步驟2：配制物質的量濃度為0．05mol／L的氯化鈣(CaCl2)溶液。
步驟3：配制海藻酸鈉溶液。稱取0.7g海藻酸鈉置于50mI燒杯中，加l0mL蒸餾水，燒杯放在酒精燈上用小火或間斷加熱。
步驟4：在冷卻至常溫的海藻酸鈉溶液中加入活化的酵母細胞，充分混合后轉入注射器
步驟5：固定化酵母細胞。以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的氯化鈣(CaCl2)溶液中形成凝膠珠，讓凝膠珠在氯化鈣(CaCl2)溶液中浸泡30分鐘。
步驟6：固定化酵母細胞(凝膠珠)用蒸餾水沖洗2～3次。
步驟7：將適量的凝膠珠放人500mL錐形瓶中，加300mL已消毒的麥芽汁，封口于25℃下發酵。
仔細閱讀上述過程，回答下列問題：
(1)步驟6用蒸餾水沖洗2～3次的目的是：洗去雜質(氯化鈣)和雜菌，防止污染。
(2)發酵產物酒精可用重鉻酸鉀進行檢驗，但需在酸性性條件下才呈現灰綠色。
(3)如何檢驗凝膠珠的質量是否合格？（方法一是用鑷子夾起一個凝膠珠放在實驗桌上用手擠壓，如果凝膠珠不容易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。方法二是在實驗桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備的凝膠珠是成功的。）
考點二、生物技術在食品加工中的應用：發酵食品加工的基本方法
一、發酵： 廣義：是通過微生物的培養來大量生產各種代謝產物的過程。包括有氧發酵（如醋酸發酵、谷氨酸發酵）和無氧發酵（如酒精發酵）。 狹義：是指微生物的無氧呼吸（包括酒精發酵、乳酸發酵等）。所以：發酵≠無氧呼吸。
應用：釀酒、發饅頭、面包制作、酒精制造、生產藥用酵母片、生產維生素、生產抗菌素等。
二、果酒制作的原理：菌種：酵母菌，單細胞真核生物，異養兼性厭氧型，適宜條件下出芽生殖1、酵母菌的兼性厭氧生活方式：在有氧條件下，有氧呼吸，大量繁殖（無性的出芽生殖）。在無氧條件下，酒精發酵。繁殖的最適溫度：20℃；酒精發酵的最適溫度：18~25℃。
在缺氧、20℃左右（一般將溫度控制在18～25℃，最適為20℃）、呈酸性的發酵液中，酵母菌可繁殖并進行酒精發酵。而絕大多數其它微生物都因無法適應這一環境而受到抑制。2、溫度對發酵的影響：酵母菌只能在一定溫度下生活。溫度低于10℃，酵母菌發育很緩慢。隨著溫度的升高，繁殖速度加快，20℃時為最佳繁殖溫度，此時酵母菌生殖速度快、生活力強。超過35℃，酵母菌生長受到抑制，繁殖速度迅速下降，到40℃酵母菌停止出芽，開始出現死亡。如果想要獲得高酒精濃度的發酵液、減少究竟的損耗，必須控制好發酵溫度。
3、防止發酵液被污染的措施：榨汁機要洗凈并晾干、發酵瓶要洗凈并用70%的酒精消毒、裝入葡萄汁后要密封
4、葡萄酒呈紅色的原因：在發酵的過程中，隨著酒精度的提高，紅葡萄皮的色素也進入發酵液，使葡萄酒呈紅色。
三、果醋制作的原理：菌種：醋酸菌，原核生物，異養需氧型，二分裂生殖1、酒變醋的原理：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變為乙醛，再將乙醛變為醋酸。C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O（發酵條件：溫度適宜、適時通氣、控制糖源供應）2、控制發酵條件的作用：①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為30～35℃，控制好發酵溫度，使發酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會。3、醋酸菌的來源：菌種可以到當地生產食醋的工廠或菌種保藏中心購買。也可以從食醋中分離醋酸菌。 果酒果醋的制作流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發酵→果酒（→醋酸發酵→果醋）四、腐乳制作的原理：菌種：毛霉，真核生物，異養需氧，孢子生殖
1、多種微生物參與了豆腐的發酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。毛霉等微生物產生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。2、腐乳制作的實驗流程：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制（1）毛霉的生長：將豆腐塊平放在籠屜內，將籠屜中的控制在15～18℃，并保持一定的溫度。約48小時后，毛霉開始生長，3天后菌絲生長旺盛，5天后豆腐塊表面布滿菌絲。豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，而現代的腐乳生產是在嚴格無菌的條件下，將優良毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣可以避免其他菌種的污染，保證產品的質量。（2）加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽，隨著層數的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽腌制的時間約為8天左右。加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會過早酥爛。同時，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質。（3）配制鹵湯：鹵湯直接關系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。加酒可以抑制微生物的生長，同時能使腐乳具有獨特的香味。香辛料可以調制腐乳的風味，也具有防腐殺菌的作用。3、實驗注意事項（1）控制好材料的用量：①用鹽腌制時，注意控制鹽的用量，鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗變質；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味。②鹵湯中酒的含量應控制在12%左右，酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，不足以抑制微生物的生長，蛋白酶的活性高，加快蛋白質的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。③所用豆腐含水量在70%左右，含水量過高不易成形。
（2）防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時，操作要迅速小心。整齊地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。③越接近瓶口，雜菌污染的可能性越大，因此要隨著豆腐層數的加高加鹽量要增加，接近瓶品表面的鹽要鋪的厚一些。
考點三、生物技術在其他方面的應用：蛋白質的提取和分離
一、蛋白質的提取和分離的基本原理和方法
1、實驗原理：蛋白質的物化理性質：形狀、大小、電荷性質和多少、溶解度、吸附性質、親和力等千差萬別，由此提取和分離各種蛋白質。2、凝膠色譜法（分配色譜法）：（1）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。（2）凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。（3）分離過程： 混合物上柱→洗脫→大分子流動快、小分子流動慢→收集大分子→收集小分子(洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質分子的差速流動。)（4）作用： 分離蛋白質，測定生物大分子分子量，蛋白質的脫鹽等。3．緩沖溶液：（1）原理：由弱酸和相應的強堿弱酸鹽組成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），調節酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。（2）作用：抵制外界酸、堿對溶液pH的干擾而保持pH穩定。4．凝膠電泳法：（1）原理：不同蛋白質的帶電性質、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速度不同。（2）分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。（3）分離過程：在一定pH下，使蛋白質基團帶上正電或負電；加入帶負電荷多的SDS，形成“蛋白質－SDS復合物”，使蛋白質遷移速率僅取決于分子大小。
二、蛋白質的提取和分離的實驗步驟：
1、樣品處理 ①紅細胞的洗滌：洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，采集的血樣要及時采用低速短時間離心分離紅細胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時間離心，如此重復洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈。②血紅蛋白的釋放 ：在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。（注：加入蒸餾水后紅細胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細胞膜，有利于血紅蛋白的釋放和分離。）2、粗分離 ①分離血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。②透析：取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質的量的濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液中，透析12h。透析可以去除樣品中分子量較小的雜質，或用于更換樣品的緩沖液。3、純化：4、純度鑒定：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳
三、注意事項1、電泳技術：電泳技術就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而達到對樣品進行分離、鑒定或提純的目的。2、紅細胞的洗滌：如果分層不明顯，可能是洗滌次數少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續血紅蛋白的提取純度。3．如何檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功：由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。4．為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成無效的空隙，使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。5．沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的：不但節約時間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠內的空氣。6．G-75：“G”代表凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5g。7．裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填緊密8．加入檸檬酸鈉有何目的？為什么要低速、短時離心？為什么要緩慢攪拌？防止血液凝固；防止白細胞沉淀；防止紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。9．與其他真核細胞相比，紅細胞的特點及這一特點對進行蛋白質的分離的意義：哺乳動物及人的成熟的紅細胞是雙面凹圓餅狀，沒有細胞核和細胞器。其含有的血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。10．如何檢測血紅蛋白的分離是否成功：如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關
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