微生物的實驗室培養?6、接種培養。接種后,也是倒置培養(原因同 5 所說)倒置后還可以防止培養基水分蒸過快發,培養基變干,無機鹽析出,營養成分濃度變大,不能使用,不利于微生物的生長。不過,分裝后的培養皿應盡快使用,那么,微生物的實驗室培養?一起來了解一下吧。
你是倒平板后才滅菌嗎?
我坦攜們做實驗都不是這樣的,都是先配制培養基,畢仔比如用三角瓶裝,滅菌后在無菌操作臺上無菌操作條件下倒平板的,凝固后,才可能倒置放置。
培養時候倒置是為了減少培養基中水分蒸發,因為除了常見的變形菌目的細菌,如革蘭氏陰性菌大腸桿菌之類的生長很快以外,不少微生物都需要培養較長時間,一兩周到四五周不等讓數伏。這時不光要倒置,培養間或培養箱中還要放一些裝水的燒杯,補充空間水分,最好能有設備可以實時控制空間濕度。
一)實驗目的(1)了解空氣中微生物的分布狀況。(2)比較普通實驗室和無菌室空氣中存在的微生物的數量和種類。(3)驗證無菌操作法在微生物學實驗中的重要性。
(二)實驗原理在我們周圍的環境中存在著種類繁多、數量龐大的微生物。空氣中也不例外。雖然空氣不是微生物棲息的良好環境。但由于氣流、灰塵和水沫的流動枝盯,人和動物的活動等原因,仍有相當數量的微生物存在。當空氣中個體微小的微生物落到適合于它們生長繁殖的固體培養基的表面時,在適溫下培養一段時間后,每一個分散的菌體或孢子就會形成一個個肉眼可見的細胞群體即菌落。觀察大小、形態各異的菌落,就可大致鑒別空氣個存在的微生物的種類。本實驗通過檢測普通實驗室和消毒后的無菌室空氣中存在的微生物,從而判斷無菌室的消毒效果,了解空氣中常見的微生物類群。
(三)實驗器材(1)培養基:1)牛肉膏蛋白胨培養基。2)馬鈴薯蔗糖培養基。(2)器材:無菌平皿若干套,酒精燈,培養箱等。
(四〕實驗方法(1)倒平板:按常法配置上述培養基,分裝于三角瓶中,高壓滅菌備用。臨用前將培養基熔化,冷卻至50℃左右,倒平板若干個備用。(2)檢測:先將無菌室的紫外燈打開,照射15min后關閉。打開上述冷凝和并了的無菌平板的皿蓋,讓其在無菌室空間和無人走動的普通實驗室空間分別暴露Ih后,蓋上皿蓋。
大多數細菌均可以通過人工方法培養,而衣原體和病毒的分離培養往往需要活組織、雞胚、特殊細胞株及動物接種。只有將微生物培養出來才能對它進行研究、鑒定和應用,對于魚類細菌性疾病的認定很有幫助。
一、接種與分離方法
根據待檢標本的性質、培養目的和所用培養基的種類,采用不同的接種方法。
1.平板劃線分離培養法
對混有多種細菌的臨床標本,采用劃線分離和培養,使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離,得到分散的單個菌落,以獲得純種。臨床送檢的標本如痰、咽試子、泌尿生殖道的分泌物和糞便等細菌檢驗均需要借助瓊脂平板劃線分離目的菌。平板劃線分離法通常有兩種方法:
(1)分區劃線分離法:此法常用于含菌量較多的標本如痰、泌尿生殖道的分泌物和糞便或混合細菌的分離。先用接種環挑取標本涂布于瓊脂平板1區(占培養基總面積的?)并作數條劃線,再于2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域,均將接種環燒灼滅菌1次,冷后再劃下一區域,每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板,培養后分別觀察1區形成菌苔,2區菌落連成線,3區和4區可分離到單個菌落。
(2)連續劃線分離法:此法常用于含菌量不多的標本或培養鏈盯物中的細菌分離培養。
1905年,德國微生物學家科赫因對結核桿菌和結核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎金。他發明固體培養基,用它分離培養細菌,創造細菌的純粹培養法。他又改進細菌染色法,為研究細枝氏菌的形態和結構創造有利條件。荷蘭科學家E.C.翰遜教授研究使啤酒發酵的酵母,創造單細胞的純粹培養法。以后,又有人采用純粹培養法選擇適當酵母,用于啤酒的工業生產,為純粹培養法在工業發酵上的應用開辟了道路。翰遜的學生哈斯發現,當時用的由明膠制成的固體培養基很容易發生液化現象,使用時有困難。哈斯的妻雹搭念子建議用瓊脂源困代替明膠,獲得了較好的效果。這種瓊脂培養基被后人采用,一直沿用到今天。后來又有人創造一種培養皿,可供微生物平板分離用。從此以后,分離出的微生物日益增多,新的微生物不斷被發現。這樣,可供工業用的微生物也日益充實起來,一支微生物生力軍異軍突起。
1.平板劃線分離培養法
對混有多種細菌,采用劃線分離和培養,使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離,得到分散的單個菌落,以芹指虧叢獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法:
①分區劃線分離法:此法常用于含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本涂布于瓊脂平板1區(占培養基總面積的?)并作數條劃線,再于2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域,均將接種環燒灼滅菌1次,冷后再劃下一區域,每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板,培養后分別觀察1區形成菌苔,2區菌落連成線,3區和4區可分離到單個菌落。
②連續劃線分離法:此法常用于含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹,然后再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種,直至劃滿瓊脂平板表面。
2.瓊脂斜面接種法
主要用于菌落的移種,以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環(針)挑取單個菌落或培養物,從培養基斜面底部向上劃一條直線,然后再從底部沿直線向上曲折連續劃線,直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種,用接種針挑取待鑒定細菌的菌落,從斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。
以上就是微生物的實驗室培養的全部內容,①搖床培養法,即將微生物接種于盛有液體培養基的三角瓶后,放在恒溫培養室中的搖床上作有節奏的振蕩,使空氣不斷進入培養液中,促其良好生長;②淺盤培養法,又稱表面培養法,在盤內放一淺層培養基。